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紫外分光光度法測定葎草中總黃酮含量

更新時間：2019-03-20 點擊次數：5671

探討葎草中總黃酮含量的測定方法。方法: 以蘆丁為對照品，采用超聲提取法提取總黃酮，用亞硝酸鈉-氯化鋁-*顯色法，顯色條件: 亞硝酸鈉質量濃度 5%、氯化鋁質量濃度 10%、*質量濃度 4%。通過紫外可見分光光度計測定律草中總黃酮的含量。結果: 檢測波長為 510 nm，蘆丁在濃度 0． 024 1 ～0． 064 0 g·L－1 范圍內呈良好的線性關系，回歸方程: y =0. 081 7x －0． 001 8( R 2 =0． 999 5) ，1 h 內基本穩定( RSD =0． 364%) ，重復性較好( RSD =0． 600 %) ，加樣回收率為 99． 46%( RSD =1． 685%) 。葎草［Humulus scandends(lour． )Merr．］又名拉拉秧、拉拉藤等，為?？浦参锏娜?［1］，分布在我國東北、華北、中南、西南等地區。另外在亞洲、北美、非洲等地區也均有分布［2］。在研究葎草提取物的抗菌作用時發現［3］，其水提取液對革蘭陽性菌具有較強的抗菌活性，并證實抗菌作用與葎草中所含的黃酮類成分有關。本研究通過采用超聲提取法提取葎草中的總黃酮，以蘆丁為對照品，以亞硝酸鈉-氯化鋁-*為顯色劑，建立紫外可見分光光度法測定葎草中總黃酮含量的方法，從而為合理利用葎草提供科學依據。

1 儀器與材料
752N-紫外可見分光光度計;SK8200HPULTRASONICINSTRUMENT(上海科導超聲儀器有限公司);AX200 萬分之一電子天平(SHMADZU COR-PORATION JAPAN)。蘆丁準品(由中國生物制品檢定所鑒定);葎草(10 月采摘于牡丹江市北山);亞硝酸鈉、三氯化鋁、*和乙
醇等(所用試劑均為分析純)。
2 方法與結果
2． 1 蘆丁對照品溶液的制備
精密稱取經干燥至恒質量的蘆丁標準品 20 mg，置于 100mL 容量瓶中，加80%乙醇至刻度，搖勻，即得對照品溶液。
2． 2 葎草供試品溶液的制備
取葎草樣品放入研缽中粉碎過篩(40 目)，精密稱取約 1g 并置于索氏提取器中，加石油醚 100 mL，回流加熱，至提取液無色，棄去石油醚提取液。待藥渣揮散干后，干燥至恒質量，轉移到平底燒瓶中，加 80%乙醇50 mL 密塞稱質量，超聲提取 0． 5 h，加活性炭脫色，過濾，取濾液。連續提取 5 次，合并各分濾液。
2． 3 測定波長的選擇取蘆丁對照品溶液 5 mL 置于 25 mL 容量瓶中并加入5%亞硝酸鈉溶液 1mL 搖勻，放置 6 min，加 10% 氯化鋁溶液1 mL 搖勻，放置 6 min，再加 4%*溶液 8 mL 搖勻，然后用 80%乙醇定容至刻度線，搖勻，放置 10 min。同時配制未加對照品只加入顯色劑的溶液作為空白對照溶液。在 440nm ～560 nm 波長范圍內掃描吸收曲線［4］。結果表明在 510nm 處有大吸光度。
2． 4 顯色劑條件的選擇
2． 4． 1 亞硝酸鈉濃度的選擇精密量取 5 份 2． 1 項下蘆丁對照品溶液 4 mL 置于 25 mL 容量瓶中，分別加入 1%、3%、5%、7%、9%濃度的亞硝酸鈉溶液 1 mL，搖勻，放置6 min，再加入 10%氯化鋁溶液 1 mL，搖勻，靜置 6 min，再加入 4% *溶液 8 mL，然后用 80% 乙醇定容至刻度線，搖勻，放置 10 min。亞硝酸鈉濃度在 5%，有大吸收。在 510 nm 處測得吸光度值，見表 1。
2． 4． 2 氯化鋁濃度的選擇精密量取 5 份 2． 1 項下蘆丁對照品溶液4 mL 置于25 mL 容量瓶中，分別5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，放置 6 min，再分別加入 8%、9%、10%、11%、12%的氯化鋁溶液 1 mL，搖勻，放置 6 min，再加入 4% *溶液 8 mL，然后用 80% 乙醇定容至刻度線，搖勻，放置10 min。氯化鋁濃度在 10%，有大吸收。在 510 nm 處測定吸光度值，見表 1。

2． 4． 3 *濃度的選擇精密量取 5 份 2． 1 項下蘆丁對照品溶液4 mL 置于25 mL 容量瓶中，分別5%亞硝酸鈉溶液 1 mL，搖勻，放置 6 min，加入 10% 氯化鋁溶液 1 m，搖勻，放置 6 min，分別加入 2%、3%、4%、5%、6%的*溶液8 mL，然后用80%乙醇定容至刻度線，搖勻，放置10 min。*濃度在 4%，有大吸收;在 510 nm 處測定吸光度值，見表 1。
2． 5 標準曲線的繪制

精密量取蘆丁對照品溶液 0． 0 mL，3． 0 mL，4． 0 mL，5． 0mL，6． 0 mL，7． 0 mL，8． 0 mL 分別置于 25 mL 容量瓶，按 2． 3項下方法操作。在 510 nm 波長處測定吸光度，以吸光度 A為縱坐標，濃度 C 為橫坐標繪制標準工作曲線，得回歸方程:Y =0． 081 7 X －0． 001 8，相關系數:R 2 =0． 999 5。線性范圍0． 024 ～0. 064 g·L－1 ，見圖 1。蘆丁對照品在 510 nm 波長處吸光度標準曲線

2． 6 穩定性實驗

按 2． 3 項下方法配制 6 份蘆丁對照品溶液，顯色后，放

置 10 min、20 min、30 min、40 min，、50min、60 min 在 510 nm波長處分別測定吸光度值，見表 2。

2． 8 加樣回收率實驗
精密稱取約 20 mg 研細過篩的葎草樣品 5 份，按 2． 2 項下方法配制，分別置于 25 mL 容量瓶中，分別加入 0． 5 mL、1. 0 mL、1． 5 mL、2． 0 mL、2． 5 mL 的對照品溶液，按 2． 3 項下
方法。在 510 nm 波長處測定吸光度值，見表 4。
2． 9 樣品含量的測定
取葎草 3 份，按 2． 2 項下方法配制，按 2． 3 項下方法操作，在 510 nm 波長處測定吸光度值。

2． 10 提凈實驗
分別取 2． 8 中 3 份提取黃酮后的葎草殘渣，再按 2． 2 項下方法提取 1 次，按 2． 3 項下方法操作。測吸光度值平均值為 0． 000 01，表明用 50 mL 80%乙醇超聲提取 5 次葎草中的總黃酮已基本提凈。

草、益母草、炮附子、黨參與生地黃，在月經期后使用烏雞白鳳丸，該療法的有效率約 75% ［11］ ;③將治療劃分為行經期與經間期。在經間期進行益氣養陰，選取知母、墨旱蓮、白術、黨參、黃芪、生地黃、女貞子、白芍 8 味藥材，在行經期另外添加 5 味藥材:烏賊骨、生蒲黃、椿白皮、茜草與地榆炭;④人為地把治療周期分為卵泡期、排卵期、黃體期與月經期。特別需要注意的是，在后一個時段，即月經期，需注意藥材選擇，進行區別用藥。

3 中西醫結合治療
中西醫結合是當今醫療界的潮流與發展趨勢，中醫固本，西醫檢查手段先進，兩者的結合能夠進一步提高治療效果。目前，在中西結合治療崩漏方面，有不同觀點。王錦華等［11］選取甘草、黨參、海螵蛸、三七、茜草、地榆炭、艾葉、當歸、黃芪、白芍、補骨脂這些中藥材，在西醫方面借助雌孕激素序貫療法、抗貧血治療、診斷性刮宮、宮縮劑、止血劑，對崩漏患者進行治療，有效率約 97． 0%;肖靜等
取八珍湯加味
與安宮黃體、乙烯雌酚這兩類西藥，綜合治療崩漏。經期第 5 天使用中藥方，在 5 ～22 d 使用安宮黃體 10 mg，每日1 次，22 ～27 d 使用乙烯雌酚，每日 1 次。
綜上所述，中藥治療功能性子宮出血的臨床，主要包括中醫辨證施治，中藥周期療法，中西結合治療等。

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